Estudio y evaluación de la carcinogénesis


Carcinogénesis se estudia con las diferentes pruebas toxicológicas estandarizados. La primera parte de estas pruebas se lleva a cabo in vitro, y - si prueban positivo - se procede con las pruebas in vitro. Este enfoque experimental en etapas se llama DECISIÓN punto de aproximación, una secuencia de pruebas que se detiene al final de cada prueba con el fin de decidir cómo proceder con las pruebas. Las etapas son cinco:

FASE A: Estructura y características del compuesto cancerígeno;

FASEB: En esta fase de pruebas a corto plazo in vitro, se utilizan células de mamífero. Las células utilizadas son la mayoría de los hepatocitos, porqueé vas a estudiar entidadesà reparar el daño que el hepatocito desarrolla dependiendo de la severidadà el daño causado por la sustancia. En pocas palabras se va a determinar no daña para séPero como una reparación del sistema è activado por la célula hepática.

El procedimiento implementado è para formar 3 culturas de hepatocitos. En los primeros hepatocitos cultivados son saludables, en la segunda se tratan con la sustancia de ensayo, y, finalmente, en la tercera se tratan con una sustancia de control definitivamente cancerígenos. Estos tres cultivos contienen una base de pirimidina radiactivo, que è la timidina tritiada, que sirve como un marcador.

Si el compuesto de prueba va a causar una mutación en el ADN de la célula responde a este problema mediante la activación de los sistemas de reparación. El fragmento de ADN que tiene subìa la mutación se corta y la acción de gracia DNApolimerasi la pieza que falta se sustituye por uno nuevo. Para la corrección, los beneficios DNApolimerasi de nuevas bases, incluyendo timidina tritiada. Por lo tanto, en la zona de corte contendrá una base radiactivo. Un análisis de la radiactividadà usted va a establecer el nivel de mutación en las células tratadas: mucho másù es alta radiactividadà y mucho más han sido mutaciones a nivel de ADN.

También en fase se realizan pruebas B también sobre las bacterias, para ser capaz de estudiar si hay retromutazioni. Las bacterias utilizadas son gi salmonellaà portadores de mutaciones. La mutación se refiere a la síntesis de histidina, y Salmonella no son capaces de crecer sin histidina. Estas colonias bacterianas se toman en parte a ser tratado con la sustancia de ensayo, en parte para el control negativo y en parte para el control positivo, a continuación, probado con un carcinógeno conocido. Si esta sustancia de ensayo è un genotóxico indirecta se debe introducir en el medio de cultivo de las enzimas que metabolizan. En este punto, usted tiene 3 plantas que serán sembradas y cultivadas en placas de Petri (no c 'è histidina en el medio de cultivo). Si no había mutaciones por el carcinógeno a ensayar, en las placas en teoría no debería haber ningún crecimiento. Si c 'è era acción mutagénica del carcinógeno, esto puedeò han modificado la primera mutación y han creado una segunda mutación en las bacterias capaces de crecer en histidina que carecen de medio. En este caso, la segunda mutación que va a modificar la primera mutación lleva el nombre de Mutación inversa. Por último, si el petri Piasta se produce un notable crecimiento de las propiedades carcinogénicas è Direct.
Siempre con un ensayo in vitro no es capaz de determinar la integridadà cromosoma. Esta prueba se realiza siempre en células de mamíferos y sirve para probar sustancias tóxicas capaces de causar mutaciones en algunas enzimas responsables de la biosíntesis de ADN. La sustancia a ensayar se somete a las pruebas in vitro. Para ser capaz de determinar si la sustancia de ensayo para actuar sull'integrità y el número de cromosomas presentes utilizando el ensayo de micronúcleos. Los micronúcleos son vesículas que se forman en el interior con una parte de la cromatina. Cromatina incorporado en estos micronúcleos podría ser o cromosomas o fragmentos de cromosomas conjunto. Micronúcleos están formados por el mal división celular que da lugar a las células hijas con el material genético no es igualmente compartida. El resultado de esta pruebaà la determinación de las sustancias que se definen venenos clastogénicos y de cabezal. La sustancia produce micronúcleos clastogénico con fragmentos acéntricos de cromosomas entonces la sustancia conduce a un desglose de los cromosomas, en lugar de la sustancia fundida produce veneno de micronúcleos que en su interior hay cromosomas enteros.
Si la sustancia examinada induce genotossicità en uno o másù Esta prueba se conoce como altamente sospechoso, luego vas directamente al paso D. Si la sustancia de ensayo no produce ningún efecto genotóxico se pasa a la fase de estudio debido a que Cé può ser un promotor.

FASEC: En esta fase puede llevarse a cabo tanto in vitro como in vivo.

Para las pruebas in vitro podrían demostrar la posibilidadà de la sustancia con el efecto promotor de romper brecha unión entre células normales y células cancerosas, con el consiguiente paso de sustancias entre las dos células.

Los ensayos in vivo è a la inducción de tumores de piel en ratones. La sustancia a ensayar se aplica dos o tres veces en una semana sobre la piel de ratones. Dentro de 2.3 meses si esta sustancia è puede ser un promotor de las formaciones de papilomas. En ratones se consideran dos datos principales: el número de ratones con papilomas y el número de papilomas en cada animal. Si la sustancia actúa como un promotor y un tumor se desarrolla en los ratones tratados que significa, que è en realidad una sustancia con efecto promotor.

Después de completar estas pruebas se pasa las pruebas in vivo a largo plazo en.

FASED: En esta fase se prueban todos los compuestos que muestran compuestos mutagénicos y todos los que no muestran mutagénico. Las pruebas que se pueden realizar son diferentes, algunos de los cuales son los ensayos realizados en el hígado, pulmón y, finalmente, en el pecho.

La prueba sobre el hígado demuestra la formación de un tumor no está recién formado, pero un foco neoplásico, a continuación, algo que se está preparando para convertirse en cáncer. Las células de este enfoque son yaà células atípicas, por lo que subìa una mutación, y se preparan para convertirse en células cancerosas. Después de un cierto tiempo, de su examen, usted va a determinar la formación de atención pre-neoplásica, va a calcular el número y la extensión de estas formaciones pre-neoplásicas.

La prueba sobre el pulmón permite la determinación de un adenoma, que è una anomalía de las células del tejido pulmonar. Incluso en este caso va a ver después de un tiempo relativamente largo (meses), el tejido pulmonar de la rata (estos adenomas son fácilmente identificables porqueé son nódulos blanquecinos epitelio pulmonar).
La prueba permite la determinación de en el cáncer de mama en el nivel del tejido glandular. Siempre va a evaluar el número de formatos de adenomas y el número de animales con adenomas.

Si hay resultados positivos de estas pruebas la sustancia de ensayo è verdaderamente un carcinógeno. En este punto se cambia a ejecutar prueba costosa y con tiempos muy largo en ejecución.

FASEE: En esta fase se está probando en el largo plazo un número variable de animales, de 20 a 50. Estas pruebas son muy caros y tomar un largo tiempo antes de tener ciertos resultados; hablando de 1/8 de la vida del animal. È posible que durante el proceso de estas pruebas algunos animales mueren, pero siempre están diseñados con una autopsia examen de tipo y el tipo histológico. Los animales seleccionados son siempre ratas y ratones y sólo 70-80% sobreviven hasta el final de la prueba a largo plazo. Los animales utilizados son destete, como più son jóvenes y másù son sensibles a los tratamientos. Durante la prueba de largo plazo, el investigador è siempre acompañado de un estadista matemático, capaz de tomar en cuenta toda la información recopilada y de reproducir los diversos datos.

Las dosis probadas en animales salen de la dosis máxima tolerada y todas sus subdivisiones, y se gradúa la respuesta dosis-respuesta en el animal.
La administración tiene que acercarse a la manera por la cual el hombre puedeò entrar en contacto con la sustancia de ensayo, entonces la vía oral, cutánea, respiratoria y si se dirige la carcinogenicidadà de un medicamento è También es útil para llevar a cabo por vía intravenosa.
Los grupos de animales ensayados fueron 4 (50 animales para cada grupo):

  • Un grupo NAIF que no tiene tratamiento;
  • Un grupo tratado con el vehículo;
  • Un grupo tratado con la sustancia de ensayo;
  • Un grupo tratado con un conocido carcinógeno.

Es muy importante que el número de animales de cada grupo es el másù puede ser igual. De hecho, si c 'è ROPPA diferencia en el número de animales de la lata prueba estadísticaò resultan ser falsas.
Los comentarios que usted va a hacer:

  • La frecuencia total de los tumores;
  • La frecuencia de algunos tipos de cáncer;
  • La frecuencia de animales con másù de un tipo de cáncer;
  • Número de tumores por animal.

Al final de todas estas fases de estudio, la sustancia se clasifica en un orden de clasificación de la IARC (Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer y el Desarrollo) y la institución de Protección Ambiental (EPA).