De ensayo para la medición de la potencia antioxidante


  • Wise ABTS
  • FRAP (férrico Reducir Poder Antioxidante)
  • TEST DPPH
  • PCL TEST (fotoquimioluminescencia)

Wise ABTS

Se trata de un método analítico que utiliza una medida de tipo espectrofotométricamente para determinar la capacidad antioxidante de una muestra. El uso de un espectrofotómetro UV-Vis se mide la absorbancia de una solución que contiene el radical ABTS•+, Generada por la oxidación dell'ABST (2,2'-azinobis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonato), una sustancia incolora que se colorea en forma radical la absorción a longitudes de onda características en el rango visible. La adición a la solución de ABTS•+ Moléculas antioxidantes, que pueden actuar tanto a través de la venta de hidrógeno que de un electrón, dando lugar a la reducción del radical de forma incolora, lo que resulta en la decoloración de la mezcla de reacción. Esta decoloración, proporcional a la cantidad de antioxidante presente, esto puede ser medido como disminución de la absorbancia a una hora determinada en una longitud de onda específica (734 nm). La capacidad antioxidante se expresa por comparación con los valores de absorbancia medidos para cantidades conocidas de una molécula antioxidante seleccionado como el estándar de referencia, que por lo general Trolox y ácido ascórbico o (en este caso se habla de actividad antioxidante Trolox TEAC Equivalente capacidad antioxidante).
La medida del antioxidante basado en los dell'ABTS uso tiene la ventaja de ser simple y rápida. Además, permite la medición de ambos antioxidantes hidrófilos y lipófilos en un amplio rango de pH. Sin embargo, se debe recordar que el radical empleado (ABTS•+) Y no fisiológico y no está presente en los sistemas biológicos y que a menudo muestran problemas de repetibilidad de la medición debido a la cinética de reacción de los diversos antioxidantes implicados.

FRAP (férrico Reducir Poder Antioxidante)


La prueba FRAP mide la capacidad de los antioxidantes contra la reducción de los iones de hierro. Se trata de un método basado en la transferencia de electrones, en la que los iones de hierro pasan de Fe3 + a Fe2 +. En ciertas condiciones de pH (3,6) y en presencia de TPTZ (2,4,6-tris (2-piridil) -s-triazina), estos iones forman complejos con características diferentes, en particular, el derivado reducido (Fe2 + -TPTZ) toma un color azul que tiene un máximo de absorción a 593 nm medido por espectrofotometría. La capacidad reductora de un antioxidante puede entonces ser medido como un cambio en la absorbancia de la solución que contiene el oxidante a la longitud de onda establecida para la comparación con la variación relativa a un estándar (por ejemplo. El ácido ascórbico).
La prueba FRAP fue diseñado para medir el poder reductor del plasma, pero luego se adaptó para probar la capacidad antioxidante de los compuestos puros y matrices complejas. De hecho, ya que este método permite evaluar sólo la capacidad de reducir a través de la transferencia de electrones, ignorando por completo la acción de los antioxidantes que actúan a través de transferencia de hidrógeno, falla para medir la contribución de las moléculas, tales como tioles y proteínas que desempeñan un papel antioxidante fundamental en fluidos biológicos (por ejemplo. en sangre). La ventaja de utilizar este método y que este es uno de los métodos más simples, rápidos y menos costosos para la determinación de la capacidad antioxidante in vitro.

TEST DPPH

El-1-picrilidrazile 2,2-difenil (DPPH•) Y un radical nitrógeno muy estable y disponible en el mercado, que se caracteriza por una intensa coloración rojo púrpura, que pierde el color cuando se reduce en presencia de una molécula con capacidad antioxidante. Por medio de la medición espectrofotométrica a 517 nm del cambio de absorbancia de la solución de DPPH después de la reacción con un compuesto antioxidante, y se puede cuantificar la capacidad de reducción de la sustancia de ensayo es que actúa con la transferencia de hidrógeno para la transferencia de electrones. El resultado se expresa generalmente como IC50, es decir, la cantidad de antioxidante capaz de reducir en un 50% la concentración inicial de DPPH.
Es una forma rápida, sencilla y económica. Los límites de esta técnica analítica están dadas por la posibilidad de que los resultados del análisis no se ven afectados en el caso en el que las moléculas de bajo consideración absorben en el mismo intervalo de la longitud de onda del radical DPPH o en presencia de moléculas grandes que no lo hacen estéricamente voluminoso llegar a reaccionar con la parte reactiva del radical. Cio determina que el DPPH reacciona con antioxidantes hasta 1000 veces más lentamente que los radicales peroxilo.

PCL TEST (fotoquimioluminescencia)

El PCL de prueba y basado en la reacción de una especie de radicales específicas, anión superóxido (O2•-), Generado fotoquímicamente por medio de radiación UV, con un compuesto capaz de emitir quimioluminiscencia. El marcador utilizado y luminol, una molécula que, cuando se oxida por los radicales libres emite luz que puede medirse con una herramienta especial (Photochem®). La presencia de antioxidantes en la mezcla de la ración desactiva las especies de radicales mediante la inhibición de la emisión de quimioluminiscencia. El PCL análisis y muy rápido y sensible. Además, con la aplicación de dos protocolos analíticos diferentes, denominado ACW (capacidad antioxidante soluble en agua) y ACL (Lipid capacidad antioxidante soluble), se puede medir por el mismo compuesto de las contribuciones a la capacidad antioxidante total, tanto del componente soluble en agua (flavonoides, vitamina C, amino etc.) que de los solubles en grasa (tocoferoles, tocotrienoles, carotenoides, etc.). Para la comparación de los valores registrados con las medidas relativas a las moléculas de referencia estándar, ácido ascórbico y Trolox ACL para el protocolo para el protocolo de ACW, tenemos la capacidad antioxidante del producto en cuestión.